Gentechnisch veränderte Zelllinien

Dr. Frank Weise
Gruppenleiter Molekular- und Neurobiologie

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Drug target gene expression - Knock-down, Knock-out, Überexpression

Zielproteine (Drug targets) werden entweder (induzierbar) überexprimiert oder in der Expression inhibiert (knock-down, knock-out). Auf diese Weise werden für die Targetvalidierung einsetzbare Modellsysteme aufgebaut, die für funktionelle Analysen bzw. Wirkstoffscreening eingesetzt werden können.

Unsere Leistungen

Ihre Targetvalidierung unterstützen wir durch

• Klonierung Ihres gene of interest in einen geeigneten Expressionsvektor
• Auswahl von Promotoren unterschiedlicher Stärke
• lentivirale Transduktion einer Zellkultur Ihrer Wahl
• Selektion stabil rekombinanter Zelllinien (polyklonal oder monoklonal) und Validierung derselben mittels Genexpressionsanalyse (auf mRNA- oder Proteinebene)
• Charakterisierung hinsichtlich der Zielprotein-Lokalisation
• funktionelle Charakterisierung (z.B. Zellproliferation, Apoptose, Metabolismus, weitere Assays auf Anfrage)

Wir bieten freedom to operate aufgrund von Lizenzen für lentivirale Technologie, CRISPR/Cas9 und RNA-Interferenztechnologien.

Seit 2001 haben wir

> 250 cDNA Expressionsvektoren,

> 850 stabil rekombinante Zelllinien für die Expression von

> 200 Zielproteinen erzeugt, und dabei

> 100 parentale Linien bzw. primäre Zellkulturen verwendet.

Methoden

• Genexpressionsanalyse (qRT-PCR, Western blot)
• Immunfluoreszenzmikroskopie
• Durchflusszytometrie
• ELISA, homogene zeitaufgelöste Fluoreszenz (HTRF)

Geräte

• Durchflusszytometrie: BD FACSmelody, BD LSR Fortessa
• Mikroskopie: CLSM (Zeiss), ImageXpress Micro confocal (Molecular Devices)
• Western blot: Typhoon Trio imager, LI-COR Odyssey
• Real time PCR: StepOnePlus, 7500 Fast
• ELISA, HTRF: Tecan Spark, BMG Labtech PHERAstar