Charakterisierung viraler Systeme für die Gentherapie - Wirksamkeitsprüfung am Beispiel von AAV
Adeno-assoziierte-Viren (AAV) stellen aufgrund ihres definierten Tropismus und ihrer Eigenschaft, nach Infektion der Zielzelle keine dauerhaften Veränderungen auf der Ebene des Genoms zu verursachen, geeignete Werkzeuge zur Entwicklung sicherer gentherapeutischer Ansätze dar.
Das NMI unterstützt seine Kunden sowohl bei einem initialen Nachweis der Funktionalität neu entwickelter therapeutischer AAV als auch bei der Entwicklung geeigneter, durchsatzfähiger zellulärer Testsysteme zur Bestimmung der Wirksamkeit unterschiedlicher Produktionschargen.
Unsere Leistungen
Einsatz zellulärer Testsysteme zur Validierung von Tropismen und quantitativen Bestimmung infektiöser Titer
Nachweis der Funktionalität eingesetzter AAV mittels Genexpressionsanalysen und/oder funktioneller Assays
Entwicklung von „Potency Assays“ zur routinemäßigen Bestimmung der Wirksamkeit unterschiedlicher Produktionschargen
Methoden
Konfokale Fluoreszenzmikroskopie
Durchflusszytometrie
Immunfluoreszenzmikroskopie
Quantitative Genexpressionsanalysen (qPCR, Western Blot)
ELISA, homogene zeitaufgelöste Fluoreszenz (HTRF)
Geräte
Durchflusszytometrie/FACS: BD FACSmelody, BD LSR Fortessa
Mikroskopie: Carl Zeiss CLSM + Cell Observer SD, Molecular Devices ImageXpress Micro confocal
Western Blot: Typhoon Trio imager, LI-COR Odyssey
Quantitative real-time PCR: Applied Biosystems StepOnePlus
ELISA, HTRF: Tecan Spark, BMG Labtech PHERstar